医院微远于EID杂志联合发表_樟脑产地

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医院潘石蕾教授、江凌晓教授团队与微远基因开展深度合作，成功搭建基于CRISPR技术的无乳链球菌快速产前筛查诊断方法，并开展了临床前瞻性研究，相关成果近日发表于EmergingInfectiousDiseases杂志(IF=6.)。检验医学部江凌晓教授、微远曾伟奇博士和吴婉婷为本文共同第一作者，产科潘石蕾教授与微远CTO许腾博士为共同通讯作者。

研究背景

无乳链球菌(GBS)垂直传播是新生儿疾病和死亡的主要原因之一，其正常定植于女性阴道及直肠内，分娩过程中，新生儿通过产道时可被感染，诱发如败血症、肺炎及脑膜炎等疾病。目前GBS产前筛查一般在孕期35-37周进行，根据筛查结果在分娩前至少4小时对孕妇进行抗生素干预。但由于GBS定植率在孕期多变，分娩前1-2周筛查结果只能在一定程度上提示临床进行抗生素干预，并不能完全反映孕妇分娩前状态，从而导致不必要的抗生素治疗。因此，建立一种快速床旁检测诊断技术对于孕妇分娩时确认其无乳链球菌定植状态至关重要。

搭建快速高敏CRISPR-GBS诊断体系

图1.CRISPR-GBS分析性能评估

研究者基于无乳链球菌高度保守区的特异性atoB基因及CRISPR快速分子诊断技术平台，整合搭建出一种快速简易提取且高效高敏检测的CRISPR-GBS诊断方法，其检测限可达60CFU/mL或5copies/反应，与同属其它链球菌(如肺炎链球菌、化脓性链球菌、轻型链球菌等)、医院感染病原体(如鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌等)和人源核酸等无交叉反应，特异性好。

CRISPR-GBS临床前瞻性研究揭示：

孕妇GBS携带率高

本研究在医院共入组名孕妇，在其孕期34-38周时期采集阴道-直肠拭子，以临床培养和PCR结果作为标准，对CRISPR-GBS方法进行临床前瞻性研究。结果表明，培养和PCR检测结果一致率高达97.1%，仅有12例样本检测结果存在差异，其中5例为培养阳性，其余7例为PCR阳性。CRISPR-GBS与培养、PCR方法相比，其临床灵敏度分别为94.5%(52/55)和94.7%(54/57)。

图2.CRISPR-GBS与培养、PCR的临床检测结果

为更好地评估CRISPR-GBS临床检测性能，研究者对培养和PCR结果一致的例样本进行了下一步分析。结果显示，CRISRP-GBS方法较其余两种方法的临床灵敏度为94.0%(47/50)，且阴性预测值达99.1%(/)。此外，对于培养及PCR检测结果均为阴性且CRISPR为阳性的样本，通过巢式PCR扩增加Sanger验证发现，有50%的样本可被验证，证明CRISRP-GBS相比培养和PCR更加灵敏，也揭示了孕妇群体更高的GBS携带率。

双重富集验证CRISPR-GBS高敏性能

图3.增菌+培养双重富集验证CRISPR-GBS高敏性能

为进一步验证高敏CRISPR-GBS提升临床灵敏度的真实性，研究者设计了一个回顾性样本验证研究。通过采样后增菌富集操作以提高培养方法的灵敏度，并对增菌前后的样本分别进行培养及CRISPR-GBS检测。10例增菌前CRISPR阳性但培养阴性的样本，在进行增菌富集操作后，有9例样本培养及CRISPR结果均为阳性，符合率高达90%，证明了CRISPR-GBS灵敏度与增菌后培养的灵敏度相当。鉴于临床应用受限于检测周期要求，无法大范围进行增菌富集后培养操作，故CRISPR-GBS在检测周期及灵敏度方面均显示出优势，有望实现无乳链球菌产前筛查床旁检测。

展望

随着CRISPR快速分子诊断技术越来越多地应用于临床前瞻性研究，凭借其灵敏度高，检测周期短以及不依赖复杂仪器设备等特点，将为病原体诊断领域增添助力。在不久的将来，CRISPR技术有望发展并应用于床旁病原体检测仪器，更好地服务于医生与患者。

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